22.以液相層析質譜儀進行單株抗體藥物的品管分析，下列那種質譜游離法最適合？

(A)大氣壓化學游離法（APCI）
(B)電子撞擊游離法（EI）
(C)電灑法（ESI）
(D)化學游離法（CI）

答案

(C) 電灑法（ESI）

本題考點：你在考場上該看透的秘密

這題的關鍵解題字眼有兩個：「液相層析（LC）」 與 「單株抗體（大分子蛋白質）」。

1. 單株抗體的特性：分子量高達 $150\text{ kDa}$（大約 15 萬打），體積巨大、極性極高，而且非常熱不穩定（Thermally labile），只要稍微加熱就會變性、斷裂。

2. 電灑游離法（Electrospray Ionization, ESI）的絕對優勢：

   • 它是最溫和的「軟游離（Soft ionization）」技術，不需要高溫氣化，直接在常壓下把液體樣品噴成霧狀，靠著電場讓液滴表面帶電並蒸發，使完好無損的蛋白質分子飛進質譜儀。

   • 它最神奇的王牌天賦叫做「產生多重電荷離子（Multiple charging）」。一個巨大的抗體分子可以吸附幾十個質子，變成 $[M + nH]^{n+}$。這會讓原本高達 15 萬的分子量，在質譜儀衡量的質量電荷比（$m/z$）中，除以 $n$ 之後降到 $1000 \sim 3000$ 之間，剛好落在一般質譜儀最舒服、解析度最好的偵測範圍內！

其他選項為什麼會大翻車？（解析 A、B、D）

• (B) EI（電子撞擊） 與 (D) CI（化學游離） $\rightarrow$ 氣相層析（GC）的傳統老臣

  • 致命傷：這兩種方法都屬於「氣相游離法」。樣品在游離前，必須先被加熱到汽化變成氣體。單株抗體這種大蛋白質如果拿去加熱，還沒變成氣體就直接燒焦、炭化了。而且它們沒辦法與液相層析（LC）的液體流速對接，主要是給 GC-MS 測小分子揮發性藥物用的。

• (A) APCI（大氣壓化學游離法） $\rightarrow$ 雖然也是 LC-MS 的好幫手，但只愛中低極性小分子

  • 致命傷：APCI 是靠一根加熱管（Nebulizer）先將 LC 的液體樣品快速「加熱汽化」，再利用電暈放電針（Corona discharge needle）去游離溶劑分子來打碎檢品。它依然需要加熱，且只能產生單一電荷離子。如果把 15 萬分子量的抗體丟進去，一來會被熱破壞，二來就算沒破壞，質譜儀的 $m/z$ 窗口也根本裝不下 15 萬這麼大的數字。

? 國考質譜游離法秒殺大連線

只要在藥析考題裡看到要分析大分子生物藥物（如：蛋白質、胜肽、單株抗體、寡核苷酸）：

1. 如果是 LC-MS（液相層析質譜） $\rightarrow$ 唯一指名 (C) ESI（電灑法）。

2. 如果是 基質輔助雷射脫附游離（MALDI） $\rightarrow$ 通常搭配 TOF（飛行時間分析器），也是大分子救星。