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學習重點 AST、ALT皆以磷酸吡哆醛（P5P）為輔酶；P5P是維生素B6的活性衍生物，可作為電子匯，穩定轉胺反應的中間產物。 共同胺基接受者為α-酮戊二酸，亦稱α-ketoglutarate或2-oxoglutarate；接受胺基後形成麩胺酸。 AST產生草醯乙酸，搭配MDH；ALT產生丙酮酸，搭配LDH，藉由偶合反應測定活性。 兩種測定皆追蹤NADH在340 nm吸光度下降的速率；在適當測定條件下，下降越快，轉胺酶活性越高。 P5P不足可能使測得活性偏低；長期洗腎患者ALT異常偏低時，須留意試劑是否添加P5P。 核心觀念 一、轉胺反應：辨認胺基供應者與接受者 轉胺酶催化胺基由胺基酸轉移至酮酸。AST與ALT使用不同的胺基酸作為胺基供應者，但在本單元的測定方向中，皆以α-酮戊二酸作為胺基接受者，形成共同產物麩胺酸（L-glutamate）。 α-ketoglutarate、α-酮戊二酸、2-oxoglutarate是同一物質，看到不同名稱不可誤認為不同受質。草醯乙酸與丙酮酸則分別是AST、ALT反應中，胺基酸失去胺基後形成的酮酸。 比較項目ASTALT 中文名稱天門冬胺酸轉胺酶丙胺酸轉胺酶 胺基供應者L-天門冬胺酸（L-aspartate）L-丙胺酸（L-alanine） 共同胺基接受者α-酮戊二酸α-酮戊二酸 轉胺反應產物草醯乙酸與麩胺酸丙酮酸與麩胺酸 所需輔酶P5PP5P 主要指示反應酵素蘋果酸脫氫酶（MDH）乳酸脫氫酶（LDH） 二、P5P的角色與缺乏影響 磷酸吡哆醛（pyridoxal-5′-phosphate）可寫成P5P、PLP或P-5′-P，是維生素B6的活性衍生物，也是許多轉胺酶所需的輔酶或輔基（prosthetic group）。 P5P參與胺基的暫時接受與轉移，可轉變為磷酸吡哆胺，再將胺基交給α-酮戊二酸。反應過程中，P5P形成的共軛系統可作為電子匯（electron sink），穩定反應中間產物。不可將電子匯的功能單純歸因於游離醛基。 當檢體中的轉胺酶未充分結合P5P，而試劑又未補充P5P時，測得的活性可能低於充分活化後的結果。添加P5P可使需要輔酶的酵素充分活化，有助於測得較完整的催化活性；但不能說所有未添加P5P的檢體都必然偏低。 長期洗腎患者可能有P5P不足。若合併慢性肝炎或脂肪肝，ALT卻僅約3 U/L，本單元的判斷重點是試劑未含P5P所造成的活性低估，可藉添加P5P後重測協助確認。不能僅由此低值認定沒有肝臟問題，也不能歸因於空腹、飯後採檢或NADP轉變成NADPH。 三、AST與MDH的偶合反應 AST的轉胺反應為： L-天門冬胺酸＋α-酮戊二酸 → 草醯乙酸＋L-麩胺酸 生成的草醯乙酸進入MDH催化的指示反應： 草醯乙酸＋NADH＋H⁺ → 蘋果酸＋NAD⁺ 因此，MDH同時利用草醯乙酸與NADH，將草醯乙酸還原為蘋果酸，並使NADH氧化成NAD⁺。草醯乙酸是主反應產物，也是指示反應受質；儀器直接追蹤的則是NADH的吸光度變化。 AST試劑中也可能使用LDH處理內源性丙酮酸，但反映AST所產生草醯乙酸的主要指示反應，仍由MDH催化，不能因此說AST與ALT皆以LDH作為主要偶合酵素。 四、ALT與LDH的偶合反應 ALT的轉胺反應為： L-丙胺酸＋α-酮戊二酸 → 丙酮酸＋L-麩胺酸 生成的丙酮酸進入LDH催化的指示反應： 丙酮酸＋NADH＋H⁺ → 乳酸＋NAD⁺ LDH將丙酮酸還原為乳酸，同時消耗NADH。所以辨認ALT測定成分時，須區分角色：L-丙胺酸與α-酮戊二酸是主反應受質，P5P是轉胺酶輔酶，LDH是偶合酵素，NADH則是光學偵測所追蹤的物質。 五、340 nm動力學測定與試劑配置 NADH在340 nm有明顯吸收，氧化成NAD⁺後，此波長的吸光度降低。因此AST與ALT皆可利用每分鐘吸光度下降量反映酵素活性，而非僅讀取單一時間點的吸光度。 適當條件下，每生成一分子的草醯乙酸或丙酮酸，即可經相應指示反應消耗一分子的NADH。測定時須有足量主反應受質、NADH與過量偶合酵素，使待測AST或ALT的活性成為控制整體速率的因素。過量MDH或LDH的目的，是讓產物迅速被處理，避免偶合步驟限制測定速率。 ALT測定不應靠加入過量丙酮酸來取得ALT最大反應速率。丙酮酸是ALT的產物，額外加入會直接被LDH利用並消耗NADH，造成與待測ALT無關的吸光度下降。 預孵育（pre-incubation）可讓檢體原有的丙酮酸等可參與偶合反應的內源性酮酸先被消耗，減少背景干擾；含P5P的測定也可藉適當孵育促進酵素活化。正式讀值應在方法規定的穩定、線性反應區間內進行。 常考陷阱 「轉胺酶的輔酶是NADH或NADPH」：錯。AST、ALT所需的是P5P；NADH參與後續脫氫酶指示反應。 「P5P來自維生素B1、B2或B12」：錯。P5P來自B6；輔酶A、生物素與FAD也不是此處的答案。 「共同胺基接受者是麩胺酸」：錯。接受者是α-酮戊二酸，接受胺基後才成為麩胺酸。 「AST與ALT都用LDH偶合」：錯。主要指示反應為AST配MDH、ALT配LDH。 「340 nm測的是草醯乙酸、ATP或NADPH」：錯。直接追蹤的是NADH，且吸光度隨反應下降。 「過量LDH與過量丙酮酸的目的相同」：錯。過量LDH可避免偶合反應成為限制；過量丙酮酸會造成額外NADH消耗。 「ALT使用D-alanine」：錯。標準測定使用L-alanine；2-oxobutyrate與所謂pyruvate-5′-phosphate也不是本測定的標準主反應受質。 「α-酮戊二酸可作為ACP或ALP的相同測定受質」：錯。此處應連結AST與ALT；ACP、ALP屬於磷酸酯水解酶。 記憶口訣 「天冬變草乙，丙胺變丙酮；胺基交酮戊，共同生麩胺。」 「AST配MDH，ALT配LDH；B6變P5P，340看NADH降。」