學習重點 心肌梗塞相關的 CK 同功酶以 CK-MB 最重要:CK-MM 主要來自骨骼肌,CK-BB 主要分布於腦與部分平滑肌,粒線體 CK 則屬另一類型。 記牢三種主要同功酶的編號與電泳順序:CK-1=CK-BB、CK-2=CK-MB、CK-3=CK-MM;鹼性電泳向陽極遷移的快慢為 BB>MB>MM。 判讀最靠近哪一極,必須先看比較範圍:一般三種胞質型 CK 中,MM 最靠近陰極;若納入粒線體 CK,則須注意其向陰極遷移的特性。 區分免疫質量分析與酵素活性測定:CK-MB 質量免疫分析可利用 anti-M、anti-B 抗體測定,不須測量 CK 催化活性,也不因 AK 活性而產生假性升高。 電泳後仍須顯示酵素活性帶:加入耦合反應試劑後,可用可見光或螢光偵測,再依條帶位置與強度判讀。 核心觀念 一、CK 的結構、組織分布與臨床意義 肌酸激酶(creatine kinase,CK)參與肌酸與磷酸肌酸之間的能量轉換。胞質型 CK 為雙次單元酵素,由 M 與 B 次單元組成 MM、MB、BB 三種同功酶。粒線體 CK 為另一類型,不能直接視為上述 M、B 次單元的第四種組合。 同功酶主要分布判讀重點 CK-MM骨骼肌,也存在於心肌骨骼肌損傷或肌肉疾病可明顯升高;正常血清 CK 活性通常以此型為主。 CK-MB心肌中相對豐富,骨骼肌也有少量比較 CK 各同功酶時,是最適合評估急性心肌梗塞的類型。 CK-BB腦、部分平滑肌及其他組織不是診斷心肌梗塞的主要 CK 指標。 粒線體 CK(CK-Mt)粒線體具有不同的電泳位置;不是心肌梗塞的特異性指標。 CK-MB 升高表示須考慮心肌損傷,但不能單獨確診心肌梗塞。心肌炎及部分骨骼肌損傷也可能使其上升,應結合症狀、心電圖及心肌肌鈣蛋白判讀。「CK 同功酶中以 CK-MB 最適合」不等於所有心肌標記都以 CK-MB 為首選。 二、鹼性電泳的基本順序與編號 在 pH 8.6 的鹼性電泳條件下,三種主要胞質型同功酶向陽極的遷移順序為:CK-BB>CK-MB>CK-MM。陽極即正極,陰極即負極;此順序反映電泳遷移率,不能只用分子量解釋。 名稱對應同功酶相對位置 CK-1CK-BB三者中最靠近陽極,向陽極移動最快。 CK-2CK-MB位於 BB 與 MM 之間。 CK-3CK-MM三者中向陽極移動最慢,最靠近陰極側。 編號越小,越靠近陽極。因此 CK-3 並非向陽極移動最快者。另須區分「最靠近陰極」與「實際向陰極移動」:前者是相對位置比較,後者是遷移方向,兩者不可混用。 三、Macro-CK、粒線體 CK 與亞型的比較 Macro-CK type I通常是 CK 與免疫球蛋白形成的複合體,常見為 CK-BB 與免疫球蛋白結合;典型電泳位置介於 CK-MB 與 CK-MM 之間。Macro-CK type II則通常與粒線體 CK 的寡聚體有關,並非 CK 與免疫球蛋白形成的同一類複合體,典型位置位於 CK-MM 的陰極側。 掌握典型位置時,可由陽極側依序記為:CK-BB → CK-MB → Macro-CK type I → CK-MM → 粒線體 CK/Macro-CK type II 的陰極側區域。異常 CK 的實際遷移位置可能隨分析條件而異,判讀仍須參照方法及對照帶。 比較 CK-BB、CK-MB、CK-MM 與 Macro-CK type I 時,CK-MM 最靠近陰極。 比較 Macro-CK type I、type II、CK-MM 的亞型時,Macro-CK type I 最靠近陽極。 比較 CK-MB 與 CK-MM、Macro-CK type I、粒線體 CK 時,CK-MB 向陽極移動較快;只有將 CK-BB 納入,才由 CK-BB 居前。 比較 CK-MB1、CK-MM1 與粒線體 CK 時,向陽極遷移的快慢為CK-MB1>CK-MM1>粒線體 CK。 CK-MB1、CK-MM1、CK-MM2、CK-MM3 中附加的數字代表同功酶的亞型,不能直接套用 CK-1、CK-2、CK-3 的命名規則。Macro-CK 可造成持續性 CK 異常,但本身不能作為急性心肌梗塞的診斷依據。 四、CK-MB 的免疫質量分析 CK-MB 質量免疫分析測量的是蛋白質含量,不是催化反應速率。可使用 anti-M 與 anti-B 抗體建立夾心式分析,辨識同時含有 M、B 次單元的 CK-MB,因此不須以 CK 酵素活性作為測量依據。 Adenylate kinase(AK,腺苷酸激酶)可能干擾 CK 的酵素活性測定。溶血會釋出紅血球內的 AK,也是活性分析須注意的原因;不能將其解釋為紅血球釋出大量 CK-MM。 CK-MB 質量免疫分析不受 AK 酵素活性干擾,也可避免溶血所造成的這類活性干擾。考試以此原理判斷「不受溶血影響」;實務上仍須依各試劑的溶血容許範圍處理檢體。另須注意,免疫抑制活性法仍測量酵素活性,不能與質量免疫分析混為一談。 五、電泳後的偵測與心肌梗塞圖譜判讀 電泳先分離同功酶,再加入反應試劑顯示活性帶。常用耦合反應為:CK 由磷酸肌酸與 ADP 產生 ATP,接著經己糖激酶及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶反應,生成NADPH,可進行螢光偵測;配合顯色系統也可用可見光偵測。因此,NADH 與乳酸脫氫酶不是此常用系統的標準組合。 檢體應依方法規範冷藏或冷凍保存,避免活性衰減,不能認為只能放置室溫。圖譜判讀先確認陽極、陰極與各帶位置,再觀察 CK-MB 是否增加。CK-MB 帶明顯增加支持心肌損傷;僅 CK-MM 增加則較偏向骨骼肌來源。不能只看到總活性高或某條帶較深,就直接判為心肌梗塞。 常考陷阱 「心肌梗塞選 CK-BB 或 CK-MM」:比較 CK 同功酶時應選 CK-MB。 「CK-3 向陽極最快」:最快是 CK-1=CK-BB,CK-3=CK-MM 最慢。 「編號依分子量大小排列」:依電泳位置命名,越靠近正極,數字越小。 「CK-MM 永遠最靠近陰極」:須看選項;若有粒線體 CK 或 Macro-CK type II,須納入其陰極側位置。 「Macro-CK 都是免疫球蛋白複合體」:type I 與免疫球蛋白有關,type II 通常與粒線體 CK 寡聚體有關。 「CK-MB 質量免疫分析會受 AK 活性干擾」:質量法依抗體辨識,不依 AK 或 CK 的催化活性測量。 「電泳後使用 NADH、乳酸脫氫酶顯示 CK」:常用系統應掌握己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶與 NADPH。 記憶口訣 「BB 一、MB 二、MM 三;越近陽極數越小。心肌看 MB,粒線體往陰走;質量靠抗體,活性防 AK。」