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學習重點 沉澱法：沉 apo B、留 HDL。以聚陰離子搭配二價陽離子，使含 apo B 的脂蛋白沉澱；離心後測定上清液中的膽固醇，即為 HDL-C。 試劑配對：dextran sulfate–MgCl2、phosphotungstate–MgCl2、heparin–MnCl2 可用於沉澱非 HDL 脂蛋白；polyethylene glycol 也可用於適當的沉澱系統。 直接均相法：利用選擇性試劑與酵素反應測定 HDL-C，不需先以沉澱、離心方式分離脂蛋白；可使用 sulfated cyclodextrin、polymer、detergent 或修飾酵素。 辨別測定標的：HDL-C 是 HDL 所攜帶的膽固醇含量。Friedewald 公式的計算目標是 LDL-C，HDL-C 則是公式所需的測定值。 核心觀念 一、HDL-C 沉澱法的原理與測定位置 HDL-C 測定的關鍵，是排除其他脂蛋白所攜帶膽固醇的干擾。傳統聚陰離子沉澱法在血清中加入聚陰離子及適當的二價陽離子，使含 apo B 的脂蛋白聚集並沉澱。離心後，HDL 保留於上清液，再以膽固醇酵素反應測定上清液中的膽固醇。 操作順序可記成：加入沉澱試劑 → 含 apo B 的脂蛋白沉澱 → 離心 → 取上清液測定胆固醇。沉澱的是非 HDL 脂蛋白，測定的是上清液中的 HDL-C；不能把兩者的位置顛倒。 這類方法主要依據脂蛋白是否含有apo B進行分離，而不是以 apo A、apo C 或 apo E 作為主要分類依據。HDL 的主要脂蛋白元為 apo A，因此在適當反應條件下保留於上清液。 脂蛋白與本單元相關的脂蛋白元沉澱法處理後的位置 乳糜微粒apo B-48沉澱物 VLDL、IDL、LDLapo B-100沉澱物 HDL主要為 apo A上清液 沉澱對象不能限縮成「主要沉澱含 apo B-48 的脂蛋白」。含 apo B-100 的 VLDL、IDL、LDL 同樣是重要的沉澱對象。正確概括方式是「沉澱含 apo B 的脂蛋白」，同時涵蓋 apo B-48 與 apo B-100。 二、沉澱試劑與陽離子的配對 聚陰離子與二價陽離子共同作用，可促進非 HDL 脂蛋白形成可分離的沉澱。常見配對必須整組記憶，不能只看到肝素或硫酸化試劑就判定正確。 試劑或組合用途與判斷重點 Dextran sulfate＋MgCl2沉澱含 apo B 的脂蛋白，HDL 留在上清液。 Phosphotungstate＋MgCl2可用於沉澱非 HDL 脂蛋白。 Heparin＋MnCl2即肝素－錳沉澱系統，主要沉澱含 apo B 的脂蛋白；題目亦可能寫成 heparin sulfate–MnCl2。 Polyethylene glycol，PEG可用於非 HDL 脂蛋白的沉澱系統；並非所有沉澱方法都必須採用聚陰離子加二價陽離子的配方。 Heparin sulfate＋NaCl不是本單元可用的非 HDL 沉澱組合；NaCl 提供一價鈉離子，不能直接取代肝素－錳系統中的二價錳離子。 血清先以 dextran sulfate／magnesium處理，主要目的是去除含 apo B 的脂蛋白，並非促使 HDL 與 leuco dye 結合、催化 peroxidase，或修飾 HDL 使膽固醇酯酶反應更專一。這是分離前處理，須與後續酵素顯色步驟區分。 肝素沉澱系統的基本配對應記為肝素搭配錳；不要將其他試劑系統使用的鎂任意移接過來。 三、直接均相法的選擇性反應 直接均相法（homogeneous method）可以測定 HDL-C。其特色是在同一液相反應系統中，以試劑控制不同脂蛋白所攜帶膽固醇的反應性，不需先沉澱、離心並取出上清液。 依試劑設計，可利用 polymer、detergent、sulfated cyclodextrin（硫酸化環糊精）及修飾酵素，遮蔽或抑制非 HDL 膽固醇的測定反應，或先將非 HDL 膽固醇以不產生最終測定訊號的方式處理，使最終訊號選擇性反映 HDL-C。 其中，sulfated cyclodextrin 是直接 HDL-C 分析法可使用的試劑。不要因名稱中同樣含有 sulfate，就將它與 dextran sulfate–magnesium 的沉澱前處理混為一談。 比較項目沉澱法直接均相法 排除非 HDL 干擾的方式將含 apo B 的脂蛋白沉澱並分離以選擇性試劑控制反應及最終測定訊號 是否先離心取上清液需要不需要 代表性試劑Dextran sulfate–MgCl2、heparin–MnCl2Sulfated cyclodextrin、polymer、detergent 膽固醇測定的位置分離後的上清液同一液相反應系統 四、抗 apo B 抗體與 Friedewald 公式 抗 apo B 抗體的直接作用對象是含 apo B 的脂蛋白，並非 HDL。因此，不能將「以抗 apo B 抗體將 HDL 分離後再測定」視為本單元的正確方法描述。判斷時應先確認抗體辨識的標的，避免將去除非 HDL 與直接捕捉 HDL 混淆。 Friedewald 公式用於估算 LDL-C。當各項濃度以 mg/dL 表示時： LDL-C＝總膽固醇－HDL-C－三酸甘油酯／5。 HDL-C 是代入公式的已知測定值；本單元不能將 Friedewald 公式當成 HDL-C 的測定或常規估算方法。 常考陷阱 「HDL-C 無法以均相法測定」：錯。直接均相法就是 HDL-C 的測定方式之一。 「沉澱法使 HDL-C 沉澱」：錯。沉澱的是含 apo B 的脂蛋白，HDL 留在上清液。 「聚陰離子主要沉澱含 apo A、apo C 或 apo E 的脂蛋白」：錯。此處的分類關鍵是 apo B。 「主要沉澱含 apo B-48 的脂蛋白」：範圍過窄。含 apo B-100 的脂蛋白也會被沉澱。 「肝素搭配任何鹽類都可沉澱非 HDL」：錯。應記住 heparin–MnCl2 的配對；heparin sulfate–NaCl 不能替代。 「均相法先以沉澱分開 HDL 與其他脂蛋白」：錯。均相法靠選擇性反應，免去先沉澱、離心分離的步驟。 「抗 apo B 抗體直接抓住 HDL」：錯。其辨識標的是 apo B，不能因為涉及脂蛋白分離就判定為正確。 「Friedewald 公式計算 HDL-C」：錯。公式的計算目標是 LDL-C。 記憶口訣 「沉 B 留 A，上清 HDL；肝素配錳，右旋糖酐硫酸配鎂；均相免分離，環糊精走直接；Friedewald 算 LDL。」